Isabelle Gardien entre à la Comédie Française en 1990, où elle sera sociétaire de 1994 à 2009. Elle y interprète tous les plus grands auteurs du répertoire classique et contemporain sous la direction, entre autres, de Jacques Lassalle, Georges Lavaudant, Daniel Mesguish, Jean-Pierre Miquel, Eric Vigner, Jean-Louis Benoit, Simon Eine, Thierry Hancisse Charles Tordjmann et Anne-Laure Liègeois.Chanteuse, elle interprète la Gantière dans « La Vie Parisienne » de Jacques Offenbach et consacre une Carte Blanche à l’univers de Kurt Weill et des années trente.
Après son départ de la Comédie Française, elle crée au théâtre des Gémeaux de Sceaux « Ce matin, la neige » de Françoise du Chaxel et incarne le rôle de Lechy dans « L’Echange » de Claudel, présenté au festival d’Avignon 2014. Elle joue Mme Jourdain dans « Le bourgeois gentilhomme » à Hong-Kong et à Pékin mis en scène par Denis Podalydès.
Elle poursuit ses nombreux doublages de films, prêtant sa voix à Cate Blanchett, Julianne Moore, Emily Watson et d’autres.
Depuis plusieurs années, elle dirige une classe d’art dramatique à l’Ecole Florent.